RT-PCR i QPCR

Odwrotna transkrypcja reakcji łańcuchowej polimerazy (RT-PCR)

RT-PCR vs. QPCR

Postępy w biotechnologii zaowocowały odkryciem kilku sposobów radzenia sobie z wymaganiami dotyczącymi przeszczepów narządów na przestrzeni lat. Wcześniej osoba, która dobrowolnie podarowała jakikolwiek organ natychmiast po śmierci potrzebującemu pacjentowi, mogła jedynie rozpocząć operację przeszczepu. Biologiczne ciągłe badania i badania prowadzą do odkrycia komórek macierzystych.

Komórki macierzyste odnoszą się do komórek pobranych z DNA zarodka, które będą służyć jako źródło do regeneracji komórek, które w zasadzie byłyby klonem narządu, na którym odzyskano DNA. Podczas gdy działacze na rzecz praw człowieka lobbują na rzecz wstrzymania takich procedur, udane operacje rzeczywiście dowiodły skuteczności rozwoju komórek macierzystych w przeszczepach narządów.

Zanim jednak uda się docenić i w pełni zrozumieć komórki macierzyste, należy zapoznać się z różnymi terminologiami związanymi z tym odkryciem naukowym. Hodowla komórek macierzystych zajmuje się DNA i jego kodowaniem. Dlatego istotne jest, aby studenci lub osoby zainteresowane tą dziedziną odróŜniały RT-PCR od qPCR.

Odwrotna reakcja łańcuchowa polimerazy (RT-PCR) jest jednym z wielu wariantów reakcji łańcuchowej polimerazy lub PCR. Ta technika laboratoryjna jest szeroko stosowana w biologii molekularnej, aby naukowcy mogli wytwarzać wiele kopii określonej sekwencji DNA poprzez proces wymyślony jako "amplifikacja". Różnica między RT-PCR a tradycyjną PCR polega na tym, że RNA jest najpierw transkrybowane jego dopełniacz DNA, który wykorzystuje odwrotną transkryptazę. Nowy komplementarny DNA zawierający odwróconą transkrypcję będzie następnie amplifikowany przy użyciu tradycyjnej PCR lub PCR w czasie rzeczywistym.

Większość studentów badających ten proces często popełnia błąd polegający na zamianie PCR z odwrotną transkrypcją i PCR w czasie rzeczywistym, ponieważ oba są w podobny sposób skracane. Aby uniknąć nieporozumień, biologowie oceniają PCR w czasie rzeczywistym jako ilościową PCR w czasie rzeczywistym lub qPCR.

QPCR różni się znacznie od RT-PCR, ponieważ qPCR jest odpowiedzialny za pomiar amplifikacji w miarę jej występowania. Można powiedzieć, że RT-PCR rozpoczyna proces amplifikacji, podczas gdy qPCR mierzy go podczas procedury.

Ilościowa real-time PCR

QPCR zrewolucjonizowało tradycyjną metodę podejścia jednokierunkowego, jeśli chodzi o kwantyfikację DNA i RNA, ponieważ zastosowanie metody qPCR umożliwia biologom określenie początkowego stężenia kwasu nukleinowego jeszcze przed zaobserwowaniem wyników reakcji i zanotowałem.

Zastosowanie qPCR, która jest obecnie uważana za najsilniejszą i najbardziej czułą technikę analizy genetycznej, znacznie się rozszerzyło. Obecnie zajmuje się ilościową analizą ekspresji genu, genotypowaniem, wykrywaniem patogenu i analizą SNP, a także pomiarami interferencji RNA.

QPCR często łączy się z procesem odwrotnej transkrypcji w celu ilościowego oznaczenia matrycowego RNA i mikroRNA obecnych w komórkach tkanek obserwowanych i eksperymentowanych z nimi. To daje kolejną widoczną różnicę między tymi dwoma: RT-PCR może być użyty do procesu amplifikacji, ale musi być połączony z qPCR dla celów kwantyfikacji.

Wiadomo również, że QPCR jest bardziej ilościowy, ponieważ dane mogą być zbierane w miarę postępu fazy eksponencjalnej (log) PCR. Biolodzy zauważają, że ilość produktu ubocznego PCR jest wprost proporcjonalna do ilości wzorcowego kwasu nukleinowego, który będzie mierzony za pomocą qPCR.

Z drugiej strony, RT-PCR nie ma charakteru ilościowego, ponieważ obserwacja intensywności wzmocnionego pasma na żelu, zgodnie z ustalonym standardem stężenia, może prowadzić do uzyskania "półilościowego" wnioskowania.

Streszczenie:

1.QPCR i RT-PCR są terminami stosowanymi w biotechnologii i są wykorzystywane do produkcji wielu kopii DNA. 2.RT-PCR stosuje się do amplifikacji odwróconej transkrypcji kodu DNA; QPCR mierzy wzmocnienie. 3.RT-PCR służy do amplifikacji, podczas gdy qPCR służy do kwantyfikacji. 4.QPCR ma charakter ilościowy, podczas gdy RT-PCR nie jest.