SDS PAGE i elektroforeza żelowa
SDS PAGE a żelowa elektroforeza
Elektroforeza może być wykorzystana do ustalenia masy obiektu zazwyczaj dla białka i kwasu dezoksyrybonukleinowego (DNA). Nić DNA, po wprowadzeniu do chemikaliów, może przyspieszyć lub spowolnić proces informacyjny. Znaczniki DNA o znanej masie są używane do przybliżenia wielkości obiektów przemieszczających się po zakończeniu elektroforezy. Elektroforeza jest najprawdopodobniej najczęściej używanym narzędziem dla biologów molekularnych i biochemików.
Istnieją dwa rodzaje elektroforezy, które są powszechnie stosowane w tym procesie. Są to elektroforeza na żelu poliakryloamidowym z dodecylosiarczanem sodu (SDS-PAGE) i natywna elektroforeza żelowa.
SDS-PAGE jest nieselektywną metodą elektroforezy żelowej stosowaną w dziedzinach takich jak: biochemia, kryminalistyka, biologia i genetyka, aby oddzielić białko od ich ruchliwości elektroforetycznej. SDS jest anionowym środkiem powierzchniowo czynnym, który może być stosowany do wspomagania lizy komórek podczas ekstrakcji DNA i do oddzielania białek w SDS-PAGE. Podczas elektroforezy najpierw mieszaninę mieszaniny upłynnia się w roztworze SDS. Następnie stosuje się substancję o nazwie Mercaptoeethanol w celu usunięcia wiązań dwusiarczkowych w celu uzyskania liniowości białka. Następnie rozpoczyna się elektroforezę. Wyniki dałyby dwie reszty cząsteczek, z których jedną jest SDS-PAGE.
Nieobecność SDS-PAGE nie stanowi problemu, ponieważ elektroforeza żelowa może być nadal wykonywana tylko wtedy, gdy białka nie tracą całej ich struktury drugorzędowej i trzeciorzędowej i nie otwierają się na ogólnie proste pręty.
W międzyczasie, natywna elektroforeza w żelu wykorzystuje żel jako środek przeciwrodnikowy. Zwykle stosuje się go do oddzielania biologicznych makrocząsteczek, takich jak DNA, kwas rybonukleinowy (RNA) i białko. Może być również stosowany do oddzielania nanocząstek.
W rodzimej elektroforezie żelowej stosowane są dwa główne żele, mianowicie:
Żel agarozowy stosowany w większych cząsteczkach. Ten żel nie identyfikuje małych różnic między dwoma pasmami molekularnymi. Jest również używany wyłącznie do oddzielania DNA. Wizualizacja żelu agarozowego odbywa się za pomocą mieszaniny bromku etydyny.
Żel poliakrylamidowy stosowany w mniejszych cząsteczkach. Ten żel identyfikuje różnice między pasmami molekularnymi. Oprócz DNA może również oddzielać białka.
Streszczenie:
1.SDS-PAGE jest nieselektywną metodą elektroforezy żelowej stosowaną w dziedzinach takich jak: biochemia, kryminalistyka, biologia i genetyka, aby oddzielić białko od ich ruchliwości elektroforetycznej, podczas gdy elektroforeza żelowa jest zwykle używana do rozdziału biologicznych makrocząsteczek, takich jak DNA, kwas rybonukleinowy (RNA) i białko. Może być również stosowany do oddzielania nanocząstek.
2.Natywna elektroforeza żelowa ma dwa rodzaje, mianowicie: żel agarozowy i żel poliakrylamidowy.
